對維生素D缺乏組和對照組的小鼠進行母性行為觀察、超聲波發聲（USV）測試、幼鼠尋回測試、社交玩耍行為測試、重復性自我梳理行為測試以及腸道生理評估、腸道微生物測量等。母性行為主要記錄10次觀察期間母體行為數量，例如舔舐/梳理和弓背哺乳。在超聲波發聲測試中，將幼鼠與母鼠分離，放置在隔音箱中，通過放置在幼鼠頭部上方約10厘米的麥克風進行收集，使用諾達思的聲音行為分析系統(UltraVox XT)進行持續三分鐘的記錄并分析。幼鼠尋回測試主要測量尋回母鼠幼崽第一只到第五只幼崽的潛伏期。社交玩耍行為測試中，使用諾達思的行為觀察記錄分析系統(The Observer XT)記錄10分鐘動物自由互動過程并進行數據分析，記錄社交玩耍行為的參數包括互動潛伏期、猛撲頻率、壓制和總玩耍持續時間等。重復性自我梳理行為測試是使用諾達思的行為觀察記錄分析系統對動物梳理自身任何部位的自我梳理行為的次數和持續時間進行評分。幼崽出生的當天被指定為出生后第0天(P0)。